流式細(xì)胞技術(shù)
流式細(xì)胞技術(shù)（flow cytometry,FCM）是利用流式細(xì)胞儀進行的一種單細(xì)胞定量分析和分選技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)是單克隆抗體及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、激光和電子計算機科學(xué)等高度發(fā)展及綜合利用的高技術(shù)產(chǎn)物。
流式細(xì)胞儀由三部分構(gòu)成
1.液流系統(tǒng)，包括流動室和液流驅(qū)動系統(tǒng)；
2.光學(xué)系統(tǒng)，包括激發(fā)光源和光束收集系統(tǒng)；
3.電子系統(tǒng)，包括光電轉(zhuǎn)換器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。流式細(xì)胞儀的工作原理是使懸浮在液體中分散的經(jīng)熒光標(biāo)記的細(xì)胞或微粒逐個通過樣品池，同時由熒光探測器捕獲熒光信號并轉(zhuǎn)換成分別代表前向散射角、側(cè)向散射角和不同熒光強度的電脈沖信號，經(jīng)計算機處理形成相應(yīng)的點圖，直方圖和加三維結(jié)構(gòu)圖像進行分析。
用于FCM的樣本是單細(xì)胞懸液，可以是血液、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液、各種體液、新鮮實體瘤的單細(xì)胞懸液以及石蠟包埋組織的單細(xì)胞懸液等。
基本原則
1.使各種液體和懸浮細(xì)胞樣本新鮮，盡快完成樣本制備和檢測；2.針對不同的細(xì)胞樣本進行適當(dāng)洗滌、酶消化或EDTA處理，以清除雜質(zhì)，使粘附的細(xì)胞彼此分離而形成單細(xì)胞狀態(tài)；3.對新鮮實體瘤組織可選用或聯(lián)用酶消化法，機械打散法和化學(xué)分散法來獲得足夠數(shù)量的單細(xì)胞懸液；4.對石蠟包埋組織應(yīng)先切成若干40-50um厚的蠟片，經(jīng)二甲苯脫蠟到水后，再用前述方法制備單細(xì)胞懸液；5.單細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)不應(yīng)少于10000個。
流式細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用：
1.其測定細(xì)胞內(nèi)DNA的變異系數(shù)最小，一般在2%以下；
2.能準(zhǔn)確地進行DNA倍體分析；
3.借助于熒光染料進行細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的定量研究；
4.快速進行細(xì)胞分選和細(xì)胞收集；
5.醫(yī)學(xué)應(yīng)用：免疫功能研究各種干細(xì)胞的檢測，癌癥病人的多藥耐藥性，細(xì)胞功能及代謝動力學(xué)研究，血小板分析（心血管疾病），流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究；
6 應(yīng)用于外周血內(nèi)皮細(xì)胞測定、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞等尖端領(lǐng)域。
